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Suivi de la quantité d'ADN au cours d'un cycle cellulaire

Suivi de la quantité d'ADN au cours d'un cycle cellulaire par cytofluorométrie

Protocole expérimental, données cytométriques disponibles et informations

Protocole expérimental
Cellules étudiées Cellules de hamster chinois
Conditions de culture

- Incubation pendant 30 mn en présence de bromodésoxyuridine (BrdUrd)

- Prélèvement de cellules toutes les heures (de t = 1heure jusqu'à t = 9 heures)

- Incubation en présence de iodure de propidium (PI) et d'anticorps anti-BrdUrd après chaque prélèvement

Données cytométriques

fichier BrdU_1h_9h.fcs

à exploiter avec le logiciel Cytométrie

Le fichier contient 9 séries de données référencées par le nombre d'heures après incubation
Informations
… à propos du BrdUrd… Le BrdUrd (= bromodésoxyuridine) est utilisé comme précurseur (c'est un analogue de la thymine) par les cellules lors de la synthèse de l'ADN. Les cellules ayant incorporé le BrdUrd pendant la phase d'incubation sont celles qui répliquaient leur ADN à ce moment. Elles sont plus ou moins synchronisées dans leur cycle cellulaire.
… à propos du PI… Le PI (iodure de propidium) est un marqueur se fixant à l'ADN. La quantité de PI fixé est proportionnelle à la quantité d'ADN cellulaire
…à propos du paramétrage du graphique (dot plot)… Les fluorescences dont l'intensité est mesurée sont celles du PI d'une part et de l'anticorps anti-BrdUrd d'autre part (paramètre BrdUrd).

Activités possibles

Titre
Contenu/objectifs
Repérage des étapes du cycle cellulaire

Exploitation de la série de données BrdU_1h pour la prise en main de la lecture de données cytométriques.

Réflexion sur les caractéristiques (teneur en ADN, position temporelle par rapport à la réplication ou à la mitose) des différentes cellules d'un même tissu.

Suivi de l'évolution de la quantité d'ADN au cours du temps Exploitation des séries  BrdU_1h à BrdU_9h pour suivre une population cellulaire pouvant servir de traceur pour la mesure de la quantité d'ADN à différents moments d'un cycle cellulaire.