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Suivi de la quantité d'ADN au cours d'un cycle cellulaire par cytofluorométrie



 
 
 
 

Didacticiel

 

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Protocole expérimental, données cytométriques disponibles et informations

Protocole expérimental
Cellules étudiées Cellules de hamster chinois
Conditions de culture

- Incubation pendant 30 mn en présence de bromodésoxyuridine (BrdUrd)

- Prélèvement de cellules toutes les heures (de t = 1heure jusqu'à t = heures)

- Incubation en présence de iodure de propidium (PI) et d'anticorps anti-BrdUrd après chaque prélèvement

Données cytométriques
fichiers ABRDU 001 à ABRDU 009 ABRDU"n" désigne le fichier de résultats concernant les cellules prélevées "n" heures après incubation
Informations
… à propos du BrdUrd… Le BrdUrd (= bromodésoxyuridine) est utilisé comme précurseur (c'est un analogue de la thymine) par les cellules lors de la synthèse de l'ADN
… à propos du PI… Le PI (iodure de propidium) est un marqueur se fixant à l'ADN. La quantité de PI fixé est proportionnelle à la quantité d'ADN cellulaire
…à propos du paramétrage du dot plot… Les fluorescences dont l'intensité est mesurée sont celles du PI d'une part (paramètre FL2-A sur le dot plot) et de l'anticorps anti-BrdUrd d'autre part (paramètre noté FL1-H sur le dot plot).

Activités possibles

Titre
Contenu/objectifs
Repérage des étapes du cycle cellulaire

Exploitation du fichier ABRDU001 pour la prise en main de la lecture de données cytométriques.

Réflexion sur les caractéristiques (teneur en ADN, position temporelle par rapport à la réplication ou à la mitose) des différentes cellules d'un même tissu.

Suivi de l'évolution de la quantité d'ADN au cours du temps Exploitation des fichiers ABRDU001 à ABRDU009 pour suivre une population cellulaire pouvant servir de traceur pour la mesure de la quantité d'ADN à différents moments d'un cycle cellulaire.