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TP Présence de chlorophylle b par chromatographie

Ce TP permet de caractériser les Chlorobiontes

TP Présence de chlorophylle b par chromatographie

 

  • Matériel privilégié :

Feuilles (épinard…)

 

  • Protocole d’extraction d’une solution de chlorophylle brute:

- Placer dans un mortier un peu de sable fin. Ajouter les feuilles bien vertes coupées en petits morceaux.

- Broyer à l’aide du pilon.

- Ajouter progressivement environ 10 ml d’alcool à 90° et continuer à broyer 5 min.

- Filtrer le contenu du mortier. Vous obtenez une solution de chlorophylle brute

 

  • Protocole de la chromatographie 

- Repérer le bas de la bande de papier à chromatographie (Whatman) : extrémité opposée à l’orifice par lequel la bande sera suspendue.

- Veiller à prendre le papier uniquement par les bords sans poser vos doigts sur la zone de migration.

- Déposer à environ 2 cm du bas de la bande, une dizaine de gouttes de la solution de chlorophylle brute obtenue, en séchant entre chaque dépôt.

- Verser du solvant organique dans l’éprouvette ; la tache de chlorophylle brute doit être située au-dessus du niveau du solvant.

- Suspendre le papier à chromatographie à l’aide d’un crochet fixé sur un bouchon, le placer dans l’éprouvette et  fermer.

- Faire l’obscurité en recouvrant l’éprouvette d’un cache noir et laisser migrer le solvant.

- Repérer les différents pigments en localisant la chlorophylle b.

 

Principe et résultat d’une chromatographie de chlorophylle brute sur épinard

d'après www.snv.jussieu.fr/.../Photosynthese/exp22.html.

  • Remarque :

De la même manière que précédemment, il serait intéressant de disposer d’un document de secours pour que les élèves puissent comparer le résultat de leur manipulation avec la place de ce pigment sur une chromatographie de référence.

 

 

  • Capacités testées :

- Respecter un protocole.

- Comprendre les techniques de migration de molécules.

- Comprendre la notion de pigment.

- Confronter des résultats expérimentaux à ceux d’un document de référence.

 

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