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TP Présence de phycoérythrine par chromatographie

Ce TP permet de caractériser les Rhodobiontes

TP Présence de phycoérythrine par chromatographie

 

  • Matériel privilégié :

Algues rouges ( Chondrus crispus…)

 

  • Protocole expérimental : Protocole d’extraction d’une solution de chlorophylle brute

- Placer dans un mortier un peu de sable fin. Ajouter les algues bien rouges coupées en petits morceaux.

- Broyer à l’aide du pilon.

- Ajouter progressivement environ 10 ml d’alcool à 90° et continuer à broyer 5 min.

- Filtrer le contenu du mortier. Vous obtenez une solution brute de pigment.

 

  • Protocole de la chromatographie 

- Repérer le bas de la bande de papier à chromatographie (Whatman) : extrémité opposée à l’orifice par lequel la bande sera suspendue.

- Veiller à prendre le papier uniquement par les bords sans poser vos doigts sur la zone de migration.

- Déposer à environ 2 cm du bas de la bande, une dizaine de gouttes de la solution brute obtenue, en séchant entre chaque dépôt.

- Verser du solvant organique dans l’éprouvette ; la tache de pigment doit être située au-dessus du niveau du solvant.

- Suspendre le papier à chromatographie à l’aide d’un crochet fixé sur un bouchon, le placer dans l’éprouvette et  fermer.  Faire l’obscurité en recouvrant l’éprouvette d’un cache noir et laisser migrer le solvant.

- Repérer les différents pigments en localisant la phycoérythrine.

 

 

 Principe et résultat d’une chromatographie de chlorophylle brute sur épinard www.snv.jussieu.fr/.../Photosynthese/exp22.html.

 

 

  • Remarque :

 

De la même manière que précédemment, il serait intéressant de disposer d’un document de secours pour que les élèves puissent comparer le résulat de leur manipulation avec la place de ce pigment sur une chromatographie de référence.

  • Capacités testées :

- Respecter un protocole.

- Confronter les données de l’expérimentation avec les résultats proposés sur un document de référence.

 

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