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Culture de moelle totale dissociée

Ecrit par Jean-Pierre Ternaux

Après dissociation enzymatique et mécanique du tissu spinal, les cellules dissociées qui contiennent des motoneurones, des interneurones et des cellules gliales peuvent être mises en culture dans des boîtes de Pétri ou sur des lamelles de verre préalablement traitées.

 Dans ce type de culture les motoneurones peuvent être identifiés à posteriori en utilisant des anticorps spécifiques dirigés contre les différentes molécules impliquées dans le métabolisme de l’acétylcholine ( Ach, ChAT, AchE ).

 Les cellules gliales et en particulier les astrocytes peuvent être identifiés en utilisant un anticorps anti Glial Acidic Protein (anti GFAP).

 

Observation de cultures primaires de moelle épinière embryonnaire de rat.

 

image1flechdiss.jpg image2flechdiss.jpg

Culture primaire de moelle épinière de rat (prélèvement à E15, 7 jours de culture). Microscopie en contraste de phase. La flèche blanche indique la présence d’un tapis de cellules gliales.

La flèche rouge met en évidence un neurone posédant des prolongements neuritiques branchés.

Echelle : 10 µm.

Culture primaire de moelle épinière de rat (prélèvement à E15, 15 jours de culture). Immunohistochimie avec un anticorps dirigé contre la « Glial Fibrillary Acidic Protein : GFAP, marqueur spécifique des cellules astrocytaires (flèche blanche, coloration brune).

Les neurones placés sous les cellules astrocytaires ne sont pas marqués (flèche rouge).

Echelle :20 µm.