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Etude in vitro de la différenciation du motoneurone

Ecrit par Jean-Pierre et Michèle TERNAUX
Directeur de Recherche CNRS
Groupe d'Etude des Réseaux Moteurs – GERM  FRE 2102 CNRS, MARSEILLE

 

 

Techniques de culture de motoneurones chez le rat


Chez le rat, les motoneurones spinaux et du tronc cérébral peuvent être isolés des autres types neuronaux (interneurones) et des cellules gliales en utilisant des techniques de purification cellulaire.

L'obtention d'une population pure de motoneurones embryonnaires permet une mise en culture et l'étude de l'évolution des caractéristiques morpho-fonctionnelles des motoneurones : la survie, la maturation des prolongements dendritiques, la différenciation des motoneurones.

 Cette analyse qualitative et quantitative peut être réalisée  lorsqu'on additionne au milieu de culture des facteurs neurotrophiques ou chémotractants.

  De la même façon, ce type d'étude peut être abordé lorsqu'on met en présence des motoneurones, des  cellules gliales, des interneurones ou des cellules cibles musculaires. Enfin, ces différents types cellulaires  peuvent être cultivés, avec les motoneurones, dans des inserts munis d'une membrane perméable permettant la diffusion dans le milieu de culture, et l'effet d'éventuelles molécules sécrétées par ces types cellulaires peut être évalué sur la morphogenèse des motoneurones.

Pour quantifier les effets de substances neurotrophiques ou chémotractantes,  il est impératif de cultiver les motoneurones dans un milieu de culture "défini", ne contenant  pas de sérum fœtal de veau, usuellement utilisé dans de nombreux types de cultures. En effet, le sérum fœtal de veau contient de nombreux facteurs trophiques.

 

 

 

Dissociation et purification des motoneurones

 

 

 

 

 

Mise en culture

 

 

  • Mise en culture: dépôt des motoneurones, milieux de culture, identification des motoneurones en culture, observation des motoneurones dans les cultures

 

 

Etude de l'evolution des motoneurones en culture

 

 

  • Evolution des motoneurones: activité électrique des motoneurones en culture et quantification des effets de différentes substances par analyse morphométrique
     

 

Morphogénèse et différenciation neuronale