Purification des acides nucléiques

Les extractions	Pour éliminer des substances indésirables (ex : protéines ou bromure d'éthidium). Principe : utilisent la solubilité différentielle des molécules (acides nucléiques / contaminant) entre deux phases non miscibles. En pratique : mélanger vigoureusement la solution d'acides nucléiques à une phase non miscible. Après centrifugation, récupérer la phase aqueuse contenant les acides nucléiques à la pipette.	Selon la phase non miscible, on distingue : * l'extraction phénolique : utilisée pour débarrasser les acides nucléiques des protéines ; le phénol étant un déprotéinisant puissant. Ex : purification d' ADN ou ARN à partir de cellules * l'extraction au chloroforme ou éther : complète toujours l'extraction précédente pour éliminer toutes traces de phénol. * l'extraction à l'isobutanol : permet d'extraire les molécules organiques (ex : bromure d'éthidium) et de concentrer la solution d'acides nucléiques de 10%.
Les précipitations	Pour récupérer les acides nucléiques sous forme solide. Ainsi protégés, ils pourront après séchage être resolubilisés à la concentration souhaitée. Précipitation à l'alcool éthylique : à haute force ionique, l'éthanol à forte concentration précipite presque totalement les acides nucléiques. Récupérer le précipité par centrifugation.	Précipitation à l'isopropanol : même principe que précédemment sauf que le sel n'est pas nécessaire et que les petits fragments d'ADN sont éliminés car non précipités. Attention : dans tous les cas, le précipité estlavé avec de l'éthanol pour se débarrasser des sels ou traces d'isopropanol, puis séché.