Digestion de l'ADN par les enzymes de restriction

1 - Dans un tube "Eppendorf", ajouter dans l'ordre suivant :
 

Tampon 10X	1 µL
H2O	3 µL
ADN	5 µL
EcoRI	1 µL
BamHI	1 µL

2 - Laisser incuber une heure à 37°C. 10 minutes avant la fin ajouter 1µL de ARNase à 10 mg/mL. Puis ajouter 3µL de bleu** (dans le cas où vous envisageriez une électrophorèse) + 2µL de BET (facultatif - BET se lie à l'ADN et permet la fluorescence).

Remarque : l'ARNase est utilisée pour éliminer les ARN contaminant faisant suite à l'extraction d'ADN plasmidique d'une culture bactérienne - cf. étape 5 du protocole correspondant).

* composition du tampon 10X : 50mM Tris HCL pH 7,5 ;10mM MgCl₂ ; 100mM NaCl - Ce tampon salin permet aux enzymes de restriction d'être actives.

** composition du bleu : 0,25 % de bleu de bromophenol (indicateur de migration de l'ADN, permettant d'estimer la vitesse apparente de migration), 40 % de saccharose (permettant d'alourdir l'ADN au fond du puits d'électrophorèse).