Hybridation

Préhybridation :

- Incuber les membranes, en boîte plastique, dans la solution d'hybridation pendant au moins 1 heure à 42°C dans un bain-marie agité.

Hybridation :

- Dénaturer la sonde à 100°C pendant 5 à 10 minutes.

- Refroidir rapidement dans la glace et y rester au moins 5 minutes.

- Mettre les membranes dans un sac à hybridation (1 membrane par sac)

- Mettre la sonde dénaturée dans environ 4 mL de solution d'hybridation et verser le tout dans le sac.

- Sceller le sac.

- Incuber à 42°C un nuit dans un bain-marie agité.

Lavages des membranes :

- Sortir les membranes du sac et les égoutter puis les mettre en boîte plastique.

- Récupérer la sonde et la garder à -20°C.

- Laver les membranes deux fois cinq minutes à température ambiante avec la solution 2X SSC/SDS 0,1% (50 mL / 100 cm²).

- Laver les membranes deux fois quinze minutes à 68°C avec la solution 0,1X SSC/SDS 0,1% (50 mL / 100 cm²).

- Eponger rapidement sur du papier filtre.

Solution d'hybridation : Formamide 50%, SSC 5X, réactif de blocage 2% ; N-Laurylsarcosine 0,1% ; Sodium dodécylsulfate 0,02%

SDS : Sodium dodécylsulfate - 1X SSC : NaCl 0,15M, NaCitrate 0,015M.

Transgenèse	Description	Ressources	Protocoles	Biblio	Sites
Mise à jour : 14/08/2001 Glossaire Histoire Téléchargements Précautions Préparation de bactéries Transformation bactérienne Préparation d'ADN plasmidique Digestion de l'ADN Transfert d'ADN sur membrane Hybridation Révélation de l'hybridation Marquage de l'ADN et purification	Hybridation Préhybridation : - Incuber les membranes, en boîte plastique, dans la solution d'hybridation pendant au moins 1 heure à 42°C dans un bain-marie agité. Hybridation : - Dénaturer la sonde à 100°C pendant 5 à 10 minutes. - Refroidir rapidement dans la glace et y rester au moins 5 minutes. - Mettre les membranes dans un sac à hybridation (1 membrane par sac) - Mettre la sonde dénaturée dans environ 4 mL de solution d'hybridation et verser le tout dans le sac. - Sceller le sac. - Incuber à 42°C un nuit dans un bain-marie agité. Lavages des membranes : - Sortir les membranes du sac et les égoutter puis les mettre en boîte plastique. - Récupérer la sonde et la garder à -20°C. - Laver les membranes deux fois cinq minutes à température ambiante avec la solution 2X SSC/SDS 0,1% (50 mL / 100 cm²). - Laver les membranes deux fois quinze minutes à 68°C avec la solution 0,1X SSC/SDS 0,1% (50 mL / 100 cm²). - Eponger rapidement sur du papier filtre. Solution d'hybridation : Formamide 50%, SSC 5X, réactif de blocage 2% ; N-Laurylsarcosine 0,1% ; Sodium dodécylsulfate 0,02% SDS : Sodium dodécylsulfate - 1X SSC : NaCl 0,15M, NaCitrate 0,015M.