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1.Les cosmides (ci-contre) sont des
plasmides dans lesquels a été inséré le site
cos
(carré noir) du phage lambda.
Le site cos rend possible l'empaquetage (in vitro) du plasmide (porteur
d'un insert) dans la tête du phage lambda.
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2.Les cosmides sont coupés en
un site de restriction unique par l'action d'une endonucléase.
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3.On mélange alors les molécules
linéarisées avec les fragments d'ADN constituant l'insert
(lignes pointillées) coupés avec la même enzyme.
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4.Cosmides et fragments s'unissent
au hassard et, dans certains cas, un fragment sera flanqué de deux
cosmides (au centre).
Si, dans une telle molécule, la distance de cos à cos
est d'environ 40 à 50 kb, alors, la séquence cos-cos a la
bonne taille pour être empaquetée dans la tête du phage
lambda.
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5.Un clivage enzymatique aux sites
cos (têtes de flèche) crée des bouts collants et, en
présence des composants du phage, l'empaquetage des molécules
recombinantes s'effectue.
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6.Après addition de la queue,
la particule peut injecter son ADN recombinant dans une bactérie
(exactement comme un phage lambda ordinaire).
L'ADN injecté se circularise, via les sites cos, et se réplique
comme un plasmide.
On peut détecter sa présence dans la cellule, par l'expression
de gènes de résistance à des antibiotiques, codés
par le plasmide.
La recherche de séquences spécifiques s'effectue par
les mêmes moyens que ceux utilisés avec les vecteurs plasmidiques.
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