Utilisation d'un cosmide


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  • 1.Les cosmides (ci-contre) sont des plasmides dans lesquels a été inséré le site cos (carré noir) du phage lambda.

  • Le site cos rend possible l'empaquetage (in vitro) du plasmide (porteur d'un insert) dans la tête du phage lambda.
  • 2.Les cosmides sont coupés en un site de restriction unique par l'action d'une endonucléase.
  • 3.On mélange alors les molécules linéarisées avec les fragments d'ADN constituant l'insert (lignes pointillées) coupés avec la même enzyme.
  • 4.Cosmides et fragments s'unissent au hassard et, dans certains cas, un fragment sera flanqué de deux cosmides (au centre).

  • Si, dans une telle molécule, la distance de cos à cos est d'environ 40 à 50 kb, alors, la séquence cos-cos a la bonne taille pour être empaquetée dans la tête du phage lambda.
  • 5.Un clivage enzymatique aux sites cos (têtes de flèche) crée des bouts collants et, en présence des composants du phage, l'empaquetage des molécules recombinantes s'effectue.
  • 6.Après addition de la queue, la particule peut injecter son ADN recombinant dans une bactérie (exactement comme un phage lambda ordinaire).

  • L'ADN injecté se circularise, via les sites cos, et se réplique comme un plasmide.
    On peut détecter sa présence dans la cellule, par l'expression de gènes de résistance à des antibiotiques, codés par le plasmide.
    La recherche de séquences spécifiques s'effectue par les mêmes moyens que ceux utilisés avec les vecteurs plasmidiques.
 
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