La méthode PCR 
(Polymerase Chain Reaction)

Objectif : amplifier in vitro de l'ADN en tirant parti du mode normal de synthèse de l'ADN in vivo.

- Chaque brin de l'ADN sert de matrice pour la synthèse du brin complémentaire
- Si on répète le processus itérativement (réaction en chaîne +à chaque cycle, le nombre de molécules double), après 20 cycles on obtient 106fois le nombre d'exemplaires du fragment désiré (cad une quantité de l'ordre du microG.pour une quantité initiale de l'ordre du picoG. !!).
- In vitro : la synthèse de mol.ADN se fait toujours à partir d'une amorce ("primer"). Cette amorce est une courte chaîne nucléotidique (oligonucléotide) nécessaire à l'accrochage de la polymérase. Donc le choix d'un couple d'amorces va déterminer les extrémités de la séquence synthétisée.
- procédé révolutionnaire : permet d'obtenir, pour la première fois, sans clônage une amplification considérable d'un fragment donné d'ADN. Gain++en sensibilité et en temps.

En pratique...

Répétition de cycles comprenant :

- la dénaturation :tous les brins d'ADN sont dissociés par la chaleur.
- l'hybridation des amorces sur un fragment d'ADN.
- l'extension : synthèse des brins à partir des amorces hybridées

Tout se fait dans un seul tube ; seule la température varie grâce à l'emploi de polymérase thermostable(Taq pol.).

- Attention au choix des amorces oligonucléotidiques,de la température, durée des étapes.

- PCR amplifie toujours de l'ADN génomique ou ADN clôné au préalable.

- Pour amplifier un fragment à partir d'ARN, +1étape avec la réverse transcriptase.

Utilisations, très nombreuses.

- analytiques : analyse qualitative de la présence, taille ou séquence de fragment d'ARN ou ADN. Analyse quantitative difficile.

*aide au clônage en s'affranchissant des limites imposées par les enzymes de restriction
*alternative à l'emploi de banques génomique ou d'ADNc.

- technologiques

*création de mutants grâce à l'utilisation d'oligonucléotides dégénérés

Shéma de la méthode PCR

Un site dédié à la PCR à l'ENS de Lyon