Glossaire
Histoire
Téléchargements
Objectif : visualiser et cartographier un fragment du génome (ADN) dont on possède une sonde.
Préparation de l'ADN à étudier
- digestion par une enzyme de restriction adéquate
- séparation des fragments par électrophorèse
- dénaturation de l'ADN par incubation du gel d'électrophorèse dans une solution de soude
- transfert de l'ADN sur une membrane de nitrocellulose ou de nylon par un flux de liquide entraînant l'ADN
- fixation covalente de l'ADN sur la membrane par cuisson(nitrocellulose) ou exposition aux U.V courts(nylon).
Avant contact avec la sonde et avec la membrane, préincuber la membrane avec de l'ADN pour en éliminer tous les sites qui n'ont pas été saturés par l'ADN lors du transfert.
Hybridation
Ajouter la sonde dénaturée à la solution d'hybridation. La température d'hybridation étant définie par la Température de la sonde soit ~65°C pour une sonde de + de 100 bases.
Lavages
Autoradiographie
La membrane est mise en contact avec un film photosensible.