"Mniprep" d'ADN plasmidique
Pour 3 mL de culture bactérienne en phase stationnaire.

1 - Centrifuger la culture dans un grand tube "Eppendorf" (30 à 60 secondes dans une minicentrifugeuse).

2 - Eliminer le surnageant - Reprendre le culot dans 350µL de STET* - Rajouter 35µL d'une solution de lyzozyme (10mg/mL)

3 - Transférer rapidement dans un bain-marie bouillant pendant 40 secondes.

4 - Centrifuger 20 minutes dans une minicentrifugeuse.

5 - Eliminer le culot avec un cure-dent. Conserver le surnageant (où se trouvent l'ADN plasmidique + des ARN variés d'origine bactérienne, le tout formant un coagulum).

6 - Rajouter 38 µL d'acétate de sodium 3M puis rajouter 400µL d'isopropanol. Agiter.

7 - Laisser le mélange 10 minutes à température ambiante.

8 - Centrifuger 5 minutes dans la minicentrifugeuse.

9 - Eliminer le surnageant (on arrive ainsi à éliminer l'ADN bactérien et à récupérer l'ADN plasmidique).

10 - Reprendre le culot dans 300µL d'acétate de sodium 0,3M (précipitation de l'ADN plasmidique).

11 - Ajouter 700µL d'éthanol froid (L'éthanol s'évapore plus facilement que l'isopropanol. Conséquence : l'éthanol précipite moins l'ADN que l'isopropanol.)

12 - Laisser le tube 1 heure dans un mélange carboglace + éthanol.

13 - Centrifuger 10 minutes.

14 - Assécher coplétement le culot dans une cloche à vide.

15 - Reprendre le culot dans 25µL d'eau distillée.

* composition du STET : 8% Sucrose - 5% Triton X100 - 50 mM Tris HCL pH 7,8 - 50 mM EDTA.