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Reconnaissance et numération des leucocytes du sang

Exploitation de données de cytométrie en flux avec le logiciel Cytométrie

Téléchargement du logiciel

Téléchargement du fichier de données : sang.fcs

Reconnaissance d'après la taille et la granularité

TailleGranularite.png

Les lymphocytes sont de petite taille et très peu granuleux.

Les granulocytes sont de grande taille et assez granuleux,

Les monocytes ont des caractéristiques intermédiaires.

  •  Lancer le logiciel Cytométrie et ouvrir le fichier sang.fcs.
  • Le logiciel affiche le graphique en nuage de points ("dot plot") de la granularité des cellules (mesure SSC du cytomètre)  en fonction de leur taille (mesure FSC).
    TvG.png
  • A l'aide du menu Catégorie/Délimiter sur le graphique, délimiter les trois grandes catégories de cellules que l'on peut distinguer sur le graphique
     
  • Dénombrement des différentes catégories : utiliser le menu Statistiques Bstats.jpg
    En faisant défiler les données dans la fenêtre statistiques, on peut vérifier que les proportions de lymphocytes, granulocytes et monocytes sont à peu près les mêmes dans les trois jeux de données.

Distinction entre les lymphocytes B et les lymphocytes T

Les lymphocytes B peuvent être caractérisés par le marqueur CD19 qui leur est spécifique.

Les lymphocytes T peuvent être reconnus à leur marqueur CD2.

CD2_CD19.PNG

On observe 2 groupes de lymphocytes (points rouges) :

ceux qui possèdent le marqueur CD19 et qui sont les lymphocytes B

et ceux possèdent le marqueur CD2 et qui sont les lymphocytes T

  • Faire afficher le choix des paramètres choixParams.jpg et choisir le CD19 comme paramètre 1 et le CD2 comme paramètre 2
     
  • On peut délimiter ces deux catégories sur le graphique :
    CD2_CD19_2.PNG
  • Si on clique à nouveau sur le menu Bstats.jpg , les nouvelles catégories seront incluses dans les statistiques.

Distinction entre les lymphocytes CD4+ et les lymphocytes CD8+

Les lymphocytes CD4+ sont des lymphocytes T possédant le marqueur CD4+. Ce sont pour la plupart des lymphocytes T auxiliaires LTa (ou LTh).

Les lymphocytes CD8+ sont des lymphocytes T possédant le marqueur CD8+. Ce sont pour la plupart des lymphocytes T cytotoxiques LTc, responsables de la destruction spécifique de cellules infectées ou altérées.

Pour délimiter ces catégories, il faut faire afficher les paramètres CD8 et CD4 qui ne sont disponibles que dans le deuxième jeu de données (CD4-CD8). Malheureusement, ce jeu de données ne comporte pas la mesure du marqueur CD2, on ne peut donc démontrer, ici, que ces deux catégories font partie des lymphocytes T.

  • Faire afficher le choix des paramètres choixParams.jpg et choisir le jeu de données CD4-CD8 chxCD4_CD8.jpg
    Le graphique en nuage de points de la granularité en fonction de la taille s'affiche. Les 3 catégories définies sur le premier graphique y sont délimitées :
    TvG_CD4_8.png
  • Choisir CD8 comme paramètre 1 et CD4 comme paramètre 2. On repère facilement les deux catégories de lymphocytes (T).
    CD4_CD8.png
    Sur ce graphique, on peut aussi remarquer que le marqueur CD4 est aussi présent à la surface des monocytes, mais moins que sur les lymphocytes CD4+. Cela explique que les monocytes sont, comme les LT CD4+, des cellules cibles du virus du SIDA.
  • Délimiter ces deux catégories de lymphocytes avant de demander des statistiques.
    CD4_CD8_2.jpg

Vérification de la délimitation de la catégorie des monocytes

 Les monocytes portent un marqueur spécifique, le CD14. Le troisième jeu de données permet de vérifier que les monocytes ont été bien délimités sur le graphique taille-granularité.

  • Faire afficher le choix des paramètres choixParams.jpg et choisir le jeu de données CD14-CD45 chxCD14_CD45.jpg
  • Le graphique en nuage de points de la granularité en fonction de la taille s'affiche.
  • Choisir CD45 comme paramètre 1 et CD14 comme paramètre 2. On repère facilement les monocytes, qui expriment nettement le marqueur CD14.
    CD14_CD45.png
    Les points de couleur verte correspondent à la délimitation des monocytes par leur taille et leur granularité qui a été réalisée sur le premier graphique.
    On remarque que cette délimitation était correcte.