Principes de la construction de vecteurs rétroviraux
B. Principes de la construction de vecteurs rétroviraux
1 - Les cellules d’emballage et la production de vecteurs rétroviraux pour la thérapie du DICS-X
La thérapie génique du DICS-X nécessite la production d’un très grand nombre de vecteurs rétroviraux afin de transducter les cellules CSH et les progéniteurs précoces des lymphocytes T. Pour obtenir cette production, les médecins ont conçu des cellules d’emballage efficaces (encore appelées cellules d’empaquetage ou d’encapsidation)
Les cellules productrices de vecteurs rétroviraux pour la thérapie génique du DICS-X le font à partir d’éléments génétiques du rétrovirus et du gène IL2RG présent dans le génome des cellules humaines, codant pour une protéine gamma c fonctionnelle.
Documents : production de vecteurs rétroviraux par les cellules d’emballage
a - Evènements intervenant dans les cellules d’emballage et les CSH cibles des vecteurs rétroviraux.
Source : Development of lentiviral vectors for gene therapy for human diseases. Blood. Volume 95, Issue 8, 15 April 2000
Questionnements
Initialement, les cellules d’emballage ne possèdent pas les constructions génétiques indiquées sur la figure b.
- Quels rôles jouent des informations introduites dans les cellules d’emballage dans la construction d’un vecteur rétroviral pour la thérapie DICS-X ?
- Indiquer la nature du « foreign gene », du « vector RNA » et de « viral protein production » indiqués dans la légende de la cellule d’emballage (Packaging cell).
2 - Principes de la réalisation des constructions génétiques et de leur incorporation dans des cellules d’emballage.
Les équipes médicales utilisent la technologie du génie génétique pour élaborer les constructions génétiques à introduire dans les cellules d’emballage. Ainsi ils ont agi sur le génome du rétrovirus MLV en supprimant les séquences Gag,Pol et Env et ont inséré à la place le gène IL2RG isolé à partir du génome humain. Le reste de la séquence du rétrovirus et notamment les deux séquences LTR. La construction génique obtenue est dite recombinante car elle associe des séquences géniques issues de deux organismes : l’homme et le rétrovirus. Les séquences LTR activent l’expression du gène IL22RG.
Gènes et constructions géniques ne peuvent pénétrer dans les cellules eucaryotes. Pour les faire entrer, il faut les insérer dans un vecteur, un plasmide. Les plasmides sont de petites molécules d’ADN circulaires, distinctes des chromosomes présents chez les bactéries et ayant la faculté de pénétrer dans les cellules eucaryotes. A l’aide des outils du génie génétique, on peut insérer la séquence d’un gène dans celle du plasmide. En pénétrant dans une cellule le plasmide introduit ainsi le gène dans la cellule.
Document : principes de la construction des cellules d’emballage (empaquetage)
Source : Slideserve. Principes des vecteurs non réplicatifs.
Ne garder que le A et réunir pro et pol en pol ?
Questionnements
- Indiquer la nature des actions réalisées pour obtenir les plasmides 1 et 2.
- La légende du génome du plasmide 3 indique un signal d’emballage (= d’encapsidation). A quel moment dans le processus de production de vecteurs intervient-elle ?
- A priori cette technologie risque-t-elle de produire des rétrovirus ?