Microorganismes: approvisionnement, culture...

• Approvisionnement:
  • BCCM (Belgian Coordinated Cultures of Microorganisms)
    Renseignements et commandes par Internet : http://www.belspo.be/bccm/lmg.htm
  • PCC (Pasteur Collection of Cyanobacteria) : http://www.pasteur.fr/Bio/PCC/
  • Dans la nature : Des cyanobactéries communes (Oscillatoria, Nostoc, Chroococcus) peuvent être collectées dans la nature (flaques d'eau, surface des sols saturés en eau, etc.) et cultivées aisément au laboratoire.
  • En France, on peut s'adresser au laboratoire d'algologie de la station biologique de Caen :
  
  
  • Contact : ALGOBANK
    Benoit VERON: 
    Laboratoire de Biologie & Biotechnologies Marines
    Universite de CAEN, BP 5186
    14032 CAEN, France

• Culture et repiquage
  • Les cultures sont conduites sur milieu liquide ou solide. Pour le milieu liquide, utiliser des flacons stériles bouchés par un tampon de gaze permettant la circulation de l'air ; pour le milieu solide, couler le milieu dans des boîtes de Pétri.
  • Les cultures doivent être exposées à la lumière (tube fluorescent d'horticulture ou devant une fenêtre) mais il faut éviter la lumière directe du Soleil.
  • Les cultures peuvent être menées à la température du laboratoire (autour de 20°C).
  • Pour la conservation à long terme, repiquer les souches tous les 3 à 6 mois.

Milieux de culture (stériliser à l'autoclave pendant 20 min à 120°C)

• Milieu d'usage général pour algues vertes unicellulaires (Bold, 1967)
  • Solutions stocks (pour chaque solution stock, masse à dissoudre dans un litre d'eau distillée)
    • 1.  NaNO₃   25 g
      2.  CaCl₂, 2H₂O  2.5 g
      3.  K₂HPO₄   7.5 g
      4.  KH₂PO₄   17.5 g
      5.  MgSO₄, 7H₂O  7.5 g
      6.  NaCl   2.5 g
      7.  EDTA
      • Dissoudre 50 g d'acide éthylène-diamine-tétra-acétique et 31 g de potasse (KOH) dans un litre d'eau distillée
      8.  Solution de fer
      • Dissoudre 4.98 g de sulfate de fer heptahydrate (FeSO₄, 7H₂O) dans un litre d'eau acidifiée préparée en ajoutant 1 mL d'acide sulfurique à 999 mL d'eau distillée.
      9.  Solution de bore
      • Dissoudre 11.42 g d'acide borique (H₃BO₃) dans un litre d'eau distillée.
      10.  Microéléments
      • Dissoudre les sels suivants dans un litre d'eau acidifiée  :
        ZnSO₄, 7H₂O   8.82 g
        MnCl₂, 4 H₂O   1.44 g
        MoO₃    0.71 g
        CuSO₄, 5H₂O   1.57 g
        Co(NO₃)₂, 6H₂O  0.49
  • Pour préparer un litre de milieu de culture à partir des 10 solutions stocks préparées à l'avance, mélanger 10 mL de chacune des solutions 1 à 6, 1 mL de chacune des solutions 7 à 10 et compléter à un litre avec de l'eau distillée.

• Milieu prêt à l'emploi
  SIGMA : Cyanobacteria BG 11 freshwater. Réf. C 3061. Environ 60 F les 100 mL (solution concentrée 50 fois, soit environ 10 F le litre).
   
• Milieu à préparer (quantités à dissoudre dans un litre d'eau distillée)
  • NaNO₃ .................................1.5 g
  • K₂HPO₄ ................................31 mg
  • MgSO₄, 7H₂O .......................75 mg
  • CaCl₂, 2H₂O .........................36 mg
  • Acide citrique, 1H₂O ...............7 mg
  • EDTA disodique .....................1 mg
  • Na₂CO₃ ................................20 mg
  • Citrate de fer ammoniacal ........6 mg
  • Solution de sels métalliques .....1 mL

Préparation de la solution de sels métalliques (pour 250 mL d'eau distillée)

• • • • H₃BO₄ .........................715 mg
      • MnCl₂, 4H₂O ...............452 mg
      • ZnSO₄, 7H₂O .................56 mg
      • Na₂MoO₄, 2H₂O ............97 mg
      • CuSO₄, 5H₂O .................20 mg
      • Cu(NO₃)₂, 6H₂O .........12.5 mg

• Milieu solide
  • Ajouter 7 g d'agar par litre de milieu et couler en boîtes de Pétri après stérilisation à l'autoclave.

Intérêt pédagogique

• Toutes les cyanobactéries peuvent être utilisées pour étudier l'impact des conditions de milieu sur leur prolifération et rechercher expérimentalement les conditions permettant leur bloom. Prévoir un temps suffisant pour le développement des cultures.
• Les pigments des cyanobactéries peuvent être étudiés dans le cadre de la photosynthèse (chromatographie, spectre d'absorption).
• Les cyanobactéries peuvent être également utilisées dans le cadre de l'évolution pour illustrer l'apparition de la photosynthèse et la formation des stromatolithes.