Suivi de la quantité d'ADN au cours d'un cycle cellulaire par cytofluorométrie
Par pothet
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Dernière modification
24/11/2020 18:16
Protocole expérimental, données cytométriques disponibles et informations
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Protocole expérimental
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| Cellules étudiées | Cellules de hamster chinois |
| Conditions de culture |
- Incubation pendant 30 mn en présence de bromodésoxyuridine (BrdUrd) - Prélèvement de cellules toutes les heures (de t = 1heure jusqu'à t = heures) - Incubation en présence de iodure de propidium (PI) et d'anticorps anti-BrdUrd après chaque prélèvement |
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Données cytométriques
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| fichiers ABRDU 001 à ABRDU 009 | ABRDU"n" désigne le fichier de résultats concernant les cellules prélevées "n" heures après incubation |
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Informations
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| à propos du BrdUrd | Le BrdUrd (= bromodésoxyuridine) est utilisé comme précurseur (c'est un analogue de la thymine) par les cellules lors de la synthèse de l'ADN |
| à propos du PI | Le PI (iodure de propidium) est un marqueur se fixant à l'ADN. La quantité de PI fixé est proportionnelle à la quantité d'ADN cellulaire |
| à propos du paramétrage du dot plot | Les fluorescences dont l'intensité est mesurée sont celles du PI d'une part (paramètre FL2-A sur le dot plot) et de l'anticorps anti-BrdUrd d'autre part (paramètre noté FL1-H sur le dot plot). |
Activités
| Repérage des étapes du cycle cellulaire |
Exploitation du fichier ABRDU001 pour la prise en main de la lecture de données cytométriques. Réflexion sur les caractéristiques (teneur en ADN, position temporelle par rapport à la réplication ou à la mitose) des différentes cellules d'un même tissu. |
| Suivi de l'évolution de la quantité d'ADN au cours du temps | Exploitation des fichiers ABRDU001 à ABRDU009 pour suivre une population cellulaire pouvant servir de traceur pour la mesure de la quantité d'ADN à différents moments d'un cycle cellulaire. |