baxbcl2

Protocole

On teste l'effet antagoniste du gène bcl-2 vis à vis du gène bax.

Création de drosophiles transgéniques portant le gène mammalien bax associé à une séquence de contrôle UAS et croisement avec des drosophiles de lignée vg -GAL4 ou avec des drosophiles de lignée vg- GAL4 portant le gène bcl-2 associé à une séquence de contrôle UAS. Le promoteur GAL4 permet de commander l'expression d'une protéine GAL4 qui est un facteur de transcription couramment utilisé pour permettre l'expression d'un transgène.

L'effet du transgène bcl-2 est testé à différentes températures : 18°C , 21°C et 25°C.

A- On mesure la viabilité des drosophiles obtenues à l'issue de ces croisements

B- On mesure l'importance de la réduction de l'aile. Les phénotypes des drosophiles issues de ces croisements sont groupés en trois catégories : "weak" = "drosophiles à ailes peu échancrées ; " strong" = drosophiles à ailes presque ou totalement absentes ; "intermediaire" = drosophiles avec une aile échancrée et l'autre réduite.

Résultats

A- Viabilité

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A 21°C et 25°C le pourcentage de drosophiles viables est plus élevé chez les drosophiles porteuses à la fois des transgènes bax et blc-2 que chez les drosophiles porteuses uniquement du transgène bax.

A 18°C il n'y a pas de différences significatives

B- Forme de l'aile

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A 21°C et 25°C aucune différence significative n'est observée dans le phénotype des ailes des drosophiles porteuses des transgènes bax et bcl-2 ou seulement bax ( résultats non présentés).

Par contre à 18°C on observe une baisse du pourcentage de drosophiles présentant le phénotype "strong" chez les drosophiles porteuses des transgènes bcl-2 et bax, par rapport à celles portant uniquement le transgène bax, et on observe une augmentation du pourcentage de drosophiles présentant le phénotype "weak" chez les drosophiles porteuses des transgènes bcl-2 et bax, par rapport à celles portant uniquement le transgène bax.

Pistes d'exploitation

A- Viabilité : à haute température le transgène bcl- 2 contrecarre l'effet létal du transgène bax.

B- Forme de l'aile : alors que l'expression du transgène bax altère la morphologie des disques imaginaux des ailes, la coexpression des transgènes bax et blc-2 restaure celle-ci ( 18°C).

L'absence d'effet du transgène bcl-2 sur la réduction de l'aile induite par bax à haute température ( 21°C) est sûrement du à un haut niveau d'expression du transgène bax à haute température.

Un phénotype macroscopique donné résulte de processus biochimiques gouvernés par plusieurs gènes.

L'expression d'un gène peut contrecarrer, inhiber l'expression d'un autre gène.

Un même paramètre de l'environnement ( température élevée, ou basse) peut avoir des effets différents sur l'activation d'un gène.

Remarques : GAL4 est un facteur de transcription couramment utilisé en vue de permettre l'expression d'un transgène. Une publication récente (Jamie M. Kramer and Brian E. Staveley Department of Biology, Memorial University of Newfoundland, St. John’s, Newfoundland, Canada, Publication du 10 mars 2003) fait part de travaux qui démontrent que GAL4, que l'on pensait inactif chez Drosophila melanogaster, s'exprime en réalité lors du développement. De ce fait, on peut exploiter la construction réalisée par les expérimentateurs (mouches exprimant GAL4 permettant l'expression du transgène bax) pour mettre en valeur l'effet du seul gène bax ou des deux gènes bax et bcl2, alors que l'intention des expérimenteurs était d'induire, via la température et le système GAL4 thermosensible, un haut niveau d'expression du gène bax et d'en constater les effets.